МИШ1СТЕРСТВО ПРОМЫШЛЕННОСТИ и ТОРГОВЛИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО

ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ (Росстандарт)

31 октября 2024 г.

Москва

Об утверждении Государственного первичного эталона единицы числа копий последовательности ДНК и Государственной поверочной схемы для средств измерений содержания копий последовательности ДНК

В соответствии с частью 5.4.18 подпункта 5.4 пункта 5 Положения о Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии, утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от 17 июня 2004 г. № 294, пунктом 6 Положения об эталонах единиц величин, используемых в сфере государственного регулирования обеспечения единства измерений, утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от 23 сентября 2010 г. № 734, руководствуясь Требованиями к содержанию и построению государственных поверочных схем и локальных поверочных схем, в том числе к их разработке, утверждению и изменению, утвержденными приказом Министерства промышленности и торговли Российской Федерации от 11 февраля 2020 г. № 456¹, Планом разработки, пересмотра и утверждения государственных поверочных схем на 2024 год, утвержденным приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 декабря 2023 г. № 2823 (с изменениями, внесенными приказами Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 2 февраля 2024 г. № 286, от 24 апреля 2024 г. № 1089, от 14 августа 2024 г. № 1893, от 9 октября 2024 г. № 2358), в целях соблюдения интересов народного хозяйства, здравоохранения и научных исследований, средств связи, приборостроительной отрасли, предприятий оборонно-промышленного комплекса, п р и к а з ы в а ю:

• 1. Утвердить:

Государственный первичный эталон единицы числа копий последовательности ДНК и присвоить ему регистрационный номер ГЭТ 220-2024 (далее - ГЭТ 220-2024);

Государственную поверочную схему для средств измерений содержания копий последовательности ДНК (далее - ГПС), прилагаемую к настоящему приказу;

ученым-хранителем ГЭТ 220-2024 руководителя научноисследовательского отдела государственных эталонов и стандартных образцов в области биоаналитических и медицинских измерений НИО 244 федерального государственного унитарного предприятия «Всероссийский научно-исследовательский институт метрологии им. Д.И. Менделеева» (далее - ФГУП «ВНИИМ»), кандидата биологических наук Вонского Максима Сергеевича.

• 2. Установить:

  требования

обязательные метрологические, технические (характеристики) ГЭТ 220-2024, указанные в его паспорте;

правила содержания и применения ГЭТ 220-2024, хранящиеся во ФГУП «ВНИИМ»;

межаттестационный интервал ГЭТ 220-2024, равный 5 годам;

место хранения, содержания и применения ГЭТ 220-2024  -

ФГУП «ВНИИМ»;

применение ГПС для ГЭТ 220-2024, прослеживаемых к нему эталонов и средств измерений содержания копий последовательности ДНК, с датой введения в действие ГПС с 5 ноября 2024 г.

• 3. Определить состав ГЭТ 220-2024, указанный в его паспорте.

• 4. ФГУП «ВНИИМ» направить сведения об утверждении ГЭТ 220-2024 и ГПС в федеральное государственное бюджетное учреждение «Всероссийский научно-исследовательский институт метрологической службы» для их внесения в Федеральный информационный фонд по обеспечению единства измерений.

• 5. Управлению метрологии, государственного контроля и надзора обеспечить размещение информации об утверждении ГЭТ 220-2024 и ГПС на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в информационно-телекоммуникационной сети «Интернет».

• 6. Контроль за исполнением настоящего приказа оставляю за собой.

f                                           >

Подлинник электронного документа, подписанного ЭП, хранится в системе электронного документооборота Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии.

Сертификат: OOBA078DCB65D74194C86A5F64A07C6B4D

Кому выдан: Шалаев Антон Павлович

Действителен: с 27.02.2024 до 22.05.2025

\_______________

УТВЕРЖДЕНА приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от «31» октября 2024 г. № 2614

ГОСУДАРСТВЕННАЯ ПОВЕРОЧНАЯ СХЕМА

ДЛЯ СРЕДСТВ ИЗМЕРЕНИЙ СОДЕРЖАНИЯ КОПИЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ДНК

• 1.1. Настоящая государственная поверочная схема для средств измерений содержания копий последовательности ДНК (далее - ГПС) распространяется на средства измерений числа копий последовательности ДНК в диапазоне значений от 100 до 100000, концентрации копий последовательности ДНК¹ в диапазоне значений от 10 мм^-3 до 10000 мм^-3 и отношения числа копий последовательности ДНК² в диапазоне значений от 1:1000 до 1:1 (далее - содержания копий последовательности ДНК) и устанавливает порядок передачи³ единицы числа копий последовательности ДНК, единицы концентрации копий последовательности ДНК и единицы отношения числа копий последовательности ДНК от государственного первичного эталона этим средствам измерений при помощи вторичных эталонов и рабочих эталонов с указанием показателей точности и методов передачи единицы величины.

• 1.2. Графическая часть государственной поверочной схемы для средств измерений содержания копий последовательности ДНК представлена в приложении А к ГПС.

В ГПС применены следующие сокращения:

ВЭТ - вторичный эталон;

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота;

НСП - неисключенная систематическая погрешность;

ПЦР - полимеразная цепная реакция;

СКО - среднеквадратичное отклонение;

Трис - трис(гидроксиметил)аминометан.

• 3.1. Государственный первичный эталон единицы числа копий последовательности ДНК ГЭТ 220-2024 состоит из комплекса для воспроизведения и передачи единиц числа копий последовательности ДНК, концентрации копий последовательности ДНК, отношения числа копий последовательности ДНК, в состав которого входят:

установка на основе метода оптической (световой) микроскопии для измерений линейных размеров капель;

отклонением результата измерений, 5₀, при 5 (пяти) независимых измерениях:

от 13,1 % до 5,0 % в диапазоне от 1:1000 до 1:67 (от 0,001 до 0,015);

от 5,0 % до 2,8 % в диапазоне свыше 1:67 до 1:33 (свыше 0,015 до 0,030); от 2,7 % до 2,5 % в диапазоне свыше 1:33 до 1:1 (свыше 0,030 до 1,000).

Относительная неисключенная систематическая погрешность до не превышает:

• 2,4 % в диапазоне от 1:1000 до 1:67 (от 0,001 до 0,015);

• 2.4 % в диапазоне свыше 1:67 до 1:33 (свыше 0,015 до 0,030);

• 2.1 % в диапазоне свыше 1:33 до 1:1 (свыше 0,030 до 1,000).

Относительная стандартная неопределенность, оцениваемая по типу

• A, и^₀, при 5 (пяти) независимых измерениях:

от 13,1 % до 5,0 % в диапазоне от 1:1000 до 1:67(от 0,001 до 0,015);

от 5,0 % до 2,8 % в диапазоне свыше 1:67 до 1:33 (свыше 0,015 до 0,030); от 2,7 % до 2,5 % в диапазоне свыше 1:33 до 1:1 (свыше 0,030 до 1,000). Относительная стандартная неопределенность, оцениваемая по типу

• B, Ub₀ , не превышает:

• 1.4 % в диапазоне от 1:1000 до 1:67 (от 0,001 до 0,015);

• 1,4 % в диапазоне свыше 1:67 до 1:33 (свыше 0,015 до 0,030);

• 1.2 % в диапазоне свыше 1:33 до 1:1 (свыше 0,030 до 1,000).

• 3.4. Государственный первичный эталон применяют для передачи единиц величин вторичным и рабочим эталонам числа копий последовательности ДНК, концентрации копий последовательности ДНК и отношения числа копий последовательности ДНК⁴:

3.4.1 методом сличений при помощи эталонов сравнения, изготовленных на комплексе установок государственного первичного эталона с метрологическими характеристиками, приведенными в таблице 1;

Таблица 1 - Требования к метрологическим характеристикам эталонов сравнения

• 3.4.2 методом прямых измерений с помощью комплекса установок государственного первичного эталона.

• 3.5. При передаче единиц содержания копий последовательности ДНК должно быть обеспечено соотношение показателей точности между государственным первичным эталоном, вторичными эталонами, рабочими эталонами и средствами измерений не более ^.

• 4.1. В качестве вторичных эталонов применяют высокоточные измерительные установки и стандартные образцы концентрации копий последовательности ДНК и отношения числа копий последовательности ДНК.

• 4.2. Высокоточные измерительные установки, выполняющие функцию вторичных эталонов, предназначены для передачи единиц содержания копий последовательности ДНК рабочим эталонам методом прямых измерений в диапазонах измерений:

числа копий последовательности ДНК - от 100 до 100000; концентрации копий последовательности ДНК - от 10 мм^-3 до 10000 мм^-3; отношения числа копий последовательностей ДНК - от 1:1000 до 1:1.

Вторичные эталоны не предназначены для решения задачи идентификации неизвестных последовательностей ДНК и воспроизведения числа копий таких последовательностей.

• 4.3. Относительные средние квадратические отклонения суммарной погрешности 52₀ (относительная суммарная стандартная неопределенность и^_О) для ВЭТ - высокоточных измерительных установок при 5 (пяти) независимых измерениях, не должны превышать значения, указанные в таблице 2.

Таблица 2 - Требования к метрологическим характеристикам вторичных эталонов - высокоточных измерительных установок

• 4.4. Высокоточные измерительные установки, выполняющие функцию вторичных эталонов, воспроизводят и передают единицы величин стандартным образцам, выполняющим функцию рабочих эталонов, методом прямых измерений.

• 4.5. Требования к метрологическим характеристикам стандартных образцов, выполняющим функцию вторичных эталонов, приведены в таблице 3.

Таблица 3 - Требования к метрологическим характеристикам стандартных образцов, выполняющим функцию вторичных эталонов

• 4.6. Стандартные образцы, выполняющие функцию вторичных эталонов, применяют для передачи единиц величин концентрации копий последовательности ДНК и отношения числа копий последовательностей ДНК средствам измерений методом прямых измерений и методом косвенных измерений⁵ с учетом требований пункта 3.6 ГПС.

• 5.1. В качестве рабочих эталонов применяют стандартные образцы состава ДНК, аттестованные по содержанию копий последовательности ДНК в диапазонах значений:

концентрации копий последовательности ДНК - от 150 мм^-3 до 10000 мм^-3; отношения числа копий последовательностей ДНК - от 1:111 до 1:1.

• 5.2. Доверительные границы относительных погрешностей д₀, при доверительной вероятности 95 %, должны находиться в диапазонах значений, указанных в таблице 4.

Т аблица 4 - Требования к метрологическим характеристикам стандартных образцов, выполняющим функцию рабочих эталонов

• 5.3. Стандартные образцы, выполняющие функцию рабочих эталонов, применяют для передачи единиц величин концентрации копий последовательности ДНК и отношения числа копий последовательностей ДНК средствам измерений методом прямых измерений и методом косвенных измерений с учетом требований пункта 3.6 ГПС.

• 5.4. Стандартные образцы, выполняющие функцию рабочих эталонов, применяют для поверки средств измерений содержания копий последовательности ДНК методом прямых измерений и методом косвенных измерений.

• 6.1. В качестве средств измерений содержания копий последовательности ДНК⁶ применяют, в том числе, установки для цифровой ПЦР и установки для ПЦР в реальном времени.

• 6.2. Средства измерений получают единицы величин от стандартных образцов, выполняющих функцию вторичных эталонов методом прямых измерений и методом косвенных измерений или от стандартных образцов, выполняющих функцию рабочих эталонов методом прямых измерений и методом косвенных измерений.

• 6.3. Доверительные границы относительных погрешностей д₀, при доверительной вероятности 95 % должны не превышать значений, указанных в таблице 5.

Таблица 5 -

¹

Величина «концентрации копий последовательности ДНК» является связанной с величиной «число

копий последовательности ДНК». Концентрацию копий последовательности ДНК Tseq рассчитывают как отношение числа копий последовательностей ДНК Nseq в образце к объему образца Vdna:          .

Vdna

²

Величина «отношение числа копий последовательностей ДНК» является связанной с величиной «число

копий последовательности ДНК». Отношение числа копий последовательностей ДНК Rseq1/seq2 представляет отношение числа копий одной последовательности ДНК Nseqi к числу копий другой последовательности ДНКNseq2 . р            _ ^seql

^: ^seql^/seq2 = ^^^^₂.

³

Воспроизведение и передачу единиц содержания копий последовательности ДНК выполняют с использованием ДНК в водных буферных растворах с низкой ионной силой (Буферы, используемые для хранения ДНК после выделения из матрицы биологического материала, такие как буферный раствор Трис/этилендиаминтетрауксусная кислота (буферный раствор ТЕ, 1х или 0,1^) с установленным значением pH 8,0 по ГОСТ ISO 21571-2018 или аналогичные).

⁴

Государственный первичный эталон подлежит сличению с международными эталонами единиц

величин Международного бюро мер и весов и национальными эталонами других государств - участников соглашения CIPM MRA (Договорённость о взаимном признании национальных эталонов, сертификатов калибровки и результатов измерений Национальных Метрологических Институтов).

⁵

Здесь и далее по тексту настоящей поверочной схемы методы прямых и косвенных измерений используются для передачи единиц величин от стандартных образцов измерительным установкам или от измерительных установок стандартным образцам, при этом метод прямых измерений подразумевает использование стандартных образцов и его аттестованного значения из паспорта как есть, без дополнительных процедур приготовления; метод косвенных измерений предполагает применение процедур разбавления стандартного образца и расчета аттестованного значения приготовленного раствора.

⁶

• ⁷ Средства измерений содержания копий последовательности ДНК применяют в клинической лабораторной диагностике, медико-генетических исследованиях, при установлении соответствия продукции санитарно-эпидемиологическим и гигиеническим требованиям, фитосанитарном контроле, контроле безопасности пищевой продукции, кормов, агропромышленного сырья, ветеринарном контроле, контроле технологических процессов в биотехнологических производствах и т.д.